染色体原位杂交来电洽谈「多图」

原位杂交；原位杂交（in situ hybridization）将标记的核酸探针与细胞或***中的核酸进行杂交，称为原位杂交！

使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在***或其他真核细胞中的位置。

以菌落原位杂交为例：对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落（100-200）进行克8隆筛选时，可采用本方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝5酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后，对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。

原位杂交技术可应用于什么方面

1.细胞特异性mRNA转录的***　可用于***图谱、***表达和***组进化的研究。

2.感6染***中病毒DNA/RNA的检测和***，如EB病毒mRNA、人类乳3头状瘤病毒和巨细胞病毒DNA的检测。

3.******、抑******及各种功能***在转录水平的表达及其变化的检测。

４.***在染色体上的***。

5.检测染色体的变化，如染色体数量异常和染色体易位等。

6.分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传

就DNA探针和RNA探针的比较，DNA探针在杂交过程中会出现探针双链之间退火的可能，也更倾向于在溶液中形成大分子的探针聚合体，从而影响其渗透能力。而RNA 探针的应用，将提高DNA-RNA杂交子的热稳定性。

Tips：RNA探针因其单链、高分子结合力、可适应高温杂交的特性，其检测特异性和灵敏度均优于DNA探针。常用的RNA探针标记方法为构建质粒后进行转率合成。通过PCR扩增的方法，可以更方便地进行RNA探针的制备；RNA探针合成后，还需验证其对目标片段检测的灵敏度和特异性。

根据不同的杂交实验要求，应选择不同的核酸探针。在大多数情况下，可以选择克0隆的DNA或cDNA双链探针。但是在有些情况下，必须选用其它类型的探针如寡核苷酸探针和RNA探针。例如，在检测靶序列上的单个碱基改变时应选用寡核苷酸探针，在检测单链靶序列时应选用与其互补的DNA单链探针（通过克0隆人M13噬菌体DNA获得）或RNA探针，寡核苷酸探针也可。长的双链DNA探针特异性较强，适宜检测复杂的靶核苷酸序列和病原体 ，但不适宜于***原位杂交，因为它不易透过细胞膜进入胞内或核内。在这种情况下，寡核苷酸探针和短的PCR标记探针（80～150bp）具有较大的优越性。