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发布时间:2022-08-31 19:23:11
间接标记的方法中应用了报告分子标记的探针,报告分子通过亲和酶促的方法进行显色。常用的报告分子如地高6辛,生物素。结合地高6辛抗6体或链霉亲和素上耦联的酶系统进行间接的底物反应检测。地高6辛标记核酸的历史可追溯到1987年,由于地高6辛是洋地黄的花和叶中特有的成分,检测时使用的地高6辛抗6体不会结合于其他的生物分子。这是相较于生物素标记系统的优势。地高6辛抗6体上可耦联碱性磷酸酶、过氧化酶,及荧光分子和胶体金等,根据不同的应用需求,呈现高信噪比的核酸检测结果。但需注意,由于引入了免6疫检测反应,在放大检测灵敏度的同时,应注意样品内源性酶的灭活,以降低检测背景。
通过不同标记方法的联合应用,还可在同一样本中实现染色体不同区域或细胞样本中不同RNA序列的多重检测。
原位杂交***(或细胞)化学技术简称原位杂交(In situ hybridization, ISH)是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与***细胞内待测的核酸,按碱基互补配对原则进行特异性结合,形成杂交体,然后用与标记物相应的检测系统,通过***化学或免3疫***化学方法在核酸原有位置进行细胞内***、定性和定量研究。为分子水平研究细胞内***表达及有关细胞5因子的调控提供了有效的工具。可视为***化学与免3疫***化学的重大突破。
原位杂交不需要从***中提取核酸,对于***中含量极低的靶序列有极高的敏***,并可完整地保护***和细胞的形态,更能准确地反映出***细胞的相互关系及功能状态。
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