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发布时间:2022-07-30 09:50:05
实验小鼠血浆取材要求
血液必须在采血时或采血后立即与剂充分混合。采血时与抗凝剂混合方法:用于血液收集的无菌1mL可以将1mL剂从小瓶吸入,然后将全部剂重新注回小瓶,即在采血前用剂“灌注”采血的。采血后与抗凝剂混合方法:向1.5mL离心管中加入不超过150μL的抗凝剂。在相对离心力14000g下离心血样10-15分。用移液管吸取分离的血浆,并转移到干净的离心管中。可将血浆样本在14000g下再离心2-3分钟,以分离任何剩余的红细胞。将分离好的血浆转移到干净的离心管中。
(1)75% (体积分数)酒精消毒孕鼠,在无菌条件下取出胎鼠,分离并切取脊髓,置于冷的无钙、镁的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。
(2)解剖显微镜无菌条件下仔细剥离脊膜及血管。
(3)用弹簧剪将脊髓剪成1cm3大小,消化液37℃消化15-20min,每五分钟振荡一次;
(4)去掉上清,加入终止液终止消化,吹打10-15次,不能有气泡,收集上清,剩余***再消化一次。
(5)4℃1000rpm离心10min,弃上清,加入种植液1重悬,培养箱内差速贴壁30min;
(6)收集上清,台盼蓝染色计数,按6*105cells/孔种入六孔板(种植液1),37℃,5%CO2,95%饱和湿度的培养箱中培养;
(7)培养第二天,全换液更换为种植液2;
(8)培养第四天,半量换液加入5uM的,24h全量换液;
(9)之后每周换液两次。
技术应用:
利用动物模型,科研工作者可以从细胞和分子水平研究的发生和发展过程,对于了解的发病机制和转移机制有重要作用,因此,模型可以作为实验假说和临床假说的实验基础,能为的病因学、发展过程和提供特有的条件。
实验流程:
模型按照建立的方法及研究目的的不同可分为***修饰小鼠模型、自发和诱发小鼠模型和移植小鼠模型,本公司可以根据需求提供适于客户研究所必需的模型。
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