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(1)75% (体积分数)酒精消毒孕鼠,在无菌条件下取出胎鼠,分离并切取脊髓,置于冷的无钙、镁的HBSS液的平皿中( 下置冰袋)。

(2)解剖显微镜无菌条件下仔细剥离脊膜及血管。

(3)用弹簧剪将脊髓剪成1cm3大小，消化液37℃消化15-20min，每五分钟振荡一次；

(4)去掉上清，加入终止液终止消化，吹打10-15次，不能有气泡，收集上清，剩余***再消化一次。

(5)4℃1000rpm离心10min，弃上清，加入种植液1重悬，培养箱内差速贴壁30min；

(6)收集上清，台盼蓝染色计数，按6*105cells/孔种入六孔板（种植液1），37℃，5%CO2，95%饱和湿度的培养箱中培养；

(7)培养第二天，全换液更换为种植液2；

(8)培养第四天，半量换液加入5uM的，24h全量换液；

(9)之后每周换液两次。

　技术应用：

　　利用动物模型，科研工作者可以从细胞和分子水平研究的发生和发展过程，对于了解的发病机制和转移机制有重要作用，因此，模型可以作为实验假说和临床假说的实验基础，能为的病因学、发展过程和提供特有的条件。

　　实验流程：

　　模型按照建立的方法及研究目的的不同可分为***修饰小鼠模型、自发和诱发小鼠模型和移植小鼠模型，本公司可以根据需求提供适于客户研究所必需的模型。

　它是伴随着生物***科学，通过漫长的动物实验过程形成的。但是，实验动物科学的迅速发展，使得实验动物的研究价值已经不于生物科学方面，而且广泛地与许多领域科学实验研究紧紧地联系在一起，成为保证现代科学实验研究的一个的条件。在很多领域的科学研究中，实验动物充当着非常重要的安全试验，效果试验、标准试验的角色。

肝纤维化动物模型法：

180～200g Wistar或SD大鼠，皮射40%-50%CCl4，油溶液(0.3ml/100g)，每周2次，第2周 始，隔日以20％-30％酒精lml灌胃(或作为饮料)，饲以单纯玉米面(混以0.5％胆固醇)，共10周。

评价：第2周出现小叶中心小片状肝细胞变性坏死， 第4周开始有较薄的纤维间隔形成，第6周间隔进一步增厚，有假小叶形成：第8周形成厚的纤维间隔，分割形成假小叶。大鼠成活率60%-80%。

该模型是目前国内外常采用的动物模型，可靠且时间短，肝纤维化进展稳定，适合于过程的动态研究。