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发布时间:2022-04-14 07:31:36
动物实验检测的取材要求介绍:
实验小鼠取材要求
采血后,立即将血液放入1.5mL离心管(不需加抗凝剂或防腐剂)。让血液在室温下静置30-60分钟。在相对离心力(relativecentrifugalforce,RCF)14000g下离心血样10-15分钟,用移液管吸取分离,并转移到干净的离心管中。可将样本在14000g下再离心2-3分钟,以分离任何剩余的红细胞。将分离好的转移到干净的离心管中。
原位杂交过程
杂交前可进行预杂交,以防止较高的背景染色。预杂交条件与杂交条件相同,只是预杂交液中不含探针和***葡聚糖。
靶DNA的变性(对mRNA的原位杂交无需此步)
样品DNA的变性在DNA-DNA杂交检测中是必须的步骤,但同时可能会造成样品形态学的部分***,此步是实验中需要优化的一个步骤。常用的变性方法为碱变性和热变性,实验时可以摸索变性时间、变性温度等参数以获得佳条件。
如使用热变性方法,可在杂交时将探针的变性和样品DNA变性同步进行:将样品和探针溶液加盖盖玻片,置于烘箱80℃变性,染色体DNA样品处理2min,后冷却至37℃进行杂交。***样品DNA的变性时间可增加至80℃10min。
肝纤维化动物模型法:
180~200g Wistar或SD大鼠,皮射40%-50%CCl4,油溶液(0.3ml/100g),每周2次,第2周 始,隔日以20%-30%酒精lml灌胃(或作为饮料),饲以单纯玉米面(混以0.5%胆固醇),共10周。
评价:第2周出现小叶中心小片状肝细胞变性坏死, 第4周开始有较薄的纤维间隔形成,第6周间隔进一步增厚,有假小叶形成:第8周形成厚的纤维间隔,分割形成假小叶。大鼠成活率60%-80%。
该模型是目前国内外常采用的动物模型,可靠且时间短,肝纤维化进展稳定,适合于过程的动态研究。
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