染色体原位杂交电话「思特进」

原位杂交(In Situ Hybridization)也叫原位杂交组化(in situ hybridization histochemistry, ISHH)，是一种固相分子杂交的方法，bai它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测***或细胞内特定核酸序列的方法。探针的种类按所带标记物可分为同位素标记探针和非同位素标记探针两大类。常用的同位素标记物有3H、35S、125I和32P，非同位素标记物中目前很常用的有生物素、地高6辛和荧光素三种。探针的种类按核酸性质不同又可分为DNA探针、cDNA探针、RNA探针和合成寡核苷酸探针。

原位杂交术可在原位检测细胞合成某种多肽或蛋白质的***表达，有很高的敏***和特异性，已成为细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。

原位杂交***（或细胞）化学技术简称原位杂交（In situ hybridization, ISH）是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与***细胞内待测的核酸，按碱基互补配对原则进行特异性结合，形成杂交体，然后用与标记物相应的检测系统，通过***化学或免3疫***化学方法在核酸原有位置进行细胞内***、定性和定量研究。为分子水平研究细胞内***表达及有关细胞5因子的调控提供了有效的工具。可视为***化学与免3疫***化学的重大突破。

原位杂交不需要从***中提取核酸，对于***中含量极低的靶序列有极高的敏***，并可完整地保护***和细胞的形态，更能准确地反映出***细胞的相互关系及功能状态。

在选择探针类型的同时，还需要选择标记方法。探针的标记方法很多，选择什么标记方法主要视个人的习惯和可利用条件而定。但在选择标记方法时，还应考虑实验的要求，如灵敏度和显示方法等。一般认为放0射性探针比非放0射性探针的灵敏度高。放0射性探针的实际灵敏度不依赖于所采用的标记方法，如随机引物延伸法往往得到比缺口平移法更高的比活性 。在检测单拷贝***序列时，应选用标记效0率0高、显示灵敏的探针标记方法。在对灵敏要求不高时，可采用保存时间长的生物素探针技术和比较稳定的碱性磷酸酶显示系统。



根据不同的杂交实验要求，应选择不同的核酸探针。在大多数情况下，可以选择克0隆的DNA或cDNA双链探针。但是在有些情况下，必须选用其它类型的探针如寡核苷酸探针和RNA探针。例如，在检测靶序列上的单个碱基改变时应选用寡核苷酸探针，在检测单链靶序列时应选用与其互补的DNA单链探针（通过克0隆人M13噬菌体DNA获得）或RNA探针，寡核苷酸探针也可。长的双链DNA探针特异性较强，适宜检测复杂的靶核苷酸序列和病原体 ，但不适宜于***原位杂交，因为它不易透过细胞膜进入胞内或核内。在这种情况下，寡核苷酸探针和短的PCR标记探针（80～150bp）具有较大的优越性。